求肌钙蛋白I和C－反应蛋白ELISA定量测定的说明书

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求肌钙蛋白I和C－反应蛋白ELISA定量测定的说明书，希望能得到大家的帮忙，谢谢，先！

人心脏特异性肌钙蛋白I酶联免疫试剂盒
美国原装 CODE: 1105
此ELISA试剂盒可用于人血清中心脏肌钙蛋白I的定量检测。肌钙蛋白I的检测在急性心肌梗塞疾病的评估中具有重要意义。
1、实验原理
心脏特异性肌钙蛋白I（cTnI）ELISA试剂盒是一种固相酶联免疫检测。此检测系统利用了对抗原分子上四种抗原决定簇具有特异性的四种单克隆抗体。抗肌钙蛋白I的三种鼠单克隆抗体作为固相被包被在微孔中，而第四种抗体是辣根过氧酶标记的酶标抗体。实验所用的样品会这四种抗体同时发生反应，因而肌钙蛋白分子就以夹心形式被夹在固相和酶标抗体中间。室温温育90min后，洗板以除去未结合的酶标抗体。之后加入TMB底物液并温育20min，结果溶液显示出蓝色。加入1N的HCl后，溶液由蓝色变成黄色。样品中肌钙蛋白的浓度与溶液所显示的颜色强度成正比。最后可在酶标仪450nm处读取OD值。
2、试剂盒组成：
1)  包被板：包被板的微孔中包被了抗肌钙蛋白I的鼠单克隆抗体,96孔
2)  标准品系列：0；2.0；7.5；30；75ng/ml,1.0ml/支
3)  酶联物：内含辣根过氧酶标记的抗肌钙蛋白I鼠单克隆抗体、Tris缓冲液和含BSA的防腐剂,13ml,1瓶
4)  TMB底物液，内含TMB底物液,11ml,1瓶
5)  终止液（1N HCl），内含已稀释好的HCl（1N），11ml，1瓶
3、实验所需器材但试剂盒不提供
1）  蒸馏水或去离子水
2）  精密移液器：5µl；10µl；50µl；100µl和1.0ml
3）  取样吸头
4）  可在450nm处读数的OD值
5）  旋涡混合器
6）  吸水纸
7）  坐标纸
8）  心肌标记物Tri-leel质控，产品编号：685（Bio-Rad Laboratories Diagnostics Group, Hercules, CA 9454）
4、试剂贮存条件：
9）  试剂盒不使用时必须贮存于2-8°C的环境中，有效期内稳定。具体效期请见试剂盒标签。
10）  将包被板密封于含干燥剂的包装袋中，避免接触潮湿空气。
5、样本收集：
6)  此试剂盒必须使用血清做为标本。
7)  采用静脉穿刺的方法采集样品。样品采集后60分钟内分离血清。
8)  收集后24小时内应检测，或在-20℃以下温度保存，最多可保存半年。
9)  避免使用明显溶血的样本（鲜红色）、脂血样本（牛奶状）或混浊样本。
10)  避免反复冻融。
6、试剂准备：
1)  实验前将试剂平衡至室温。
2)  用双蒸水溶解标准品系列，1ml/支，至少混匀20分钟。溶解后的标准品在2--8℃下只能保存8小时。为了最大程度的保证已稀释标准品的稳定性，我们应当将其分装冻存于-20℃或更低温度的环境下，每份标准品只能冻融一次。
3)  样品中肌钙蛋白含量可能高于100ng/ml的样品可用稀释液稀释后，再定量检测。
7、实验步骤：
1)  将所需数目的板条置于板架上。
2)  加100µl标准品、样本和质控品于相应反应孔中。
3)  各孔加100µl酶联物。
4)  旋涡混匀30秒，注意：充分混合。
5)  室温（18--25℃）温育90分钟。
6)  弃去孔中反应液。
7)  双蒸水或去离子水洗板5次。
8)  在吸水纸上拍干反应板。
9)  加100µl TMB试剂于各孔中，轻轻混合5秒。
10)  室温温育20分钟。
11)  加100µl终止液于各孔中。
12)  混合30秒，务必确保溶液颜色由蓝色彻底变成黄色。
13)  加终止液后15分钟内450nm波长读OD值。
8、结果：
1)  计算每一标准品、质控品和样品的平均OD值。
2)  利用点划线模式在坐标纸上做标准曲线，标准品的含量为X轴、OD值为Y轴。
3)  以样本的OD值在曲线上得到样本的肌钙蛋白I含量ng/ml。
4)  样本含量超过100ng/ml，应当用样品稀释液10倍稀释后再测定。最后将检测到肌钙蛋白I的浓度乘以相应的稀释倍数即可。

本译文仅供参考，详情请以原文为准。

CRP(C-反应蛋白)EISA说明书
（德国IBL：EU59131）
1、  应用范围
此CRP的ELISA试剂盒可用于人血清和血浆中C-反应蛋白的定量检测。
2、实验原理
稀释好的标准血清、病人样品和包被在包被板上的抗CRP抗体一起温育，在此温育步骤中，CRP特异的结合到包被板上。之后洗板以除去未结合的血清蛋白，再用辣根过氧酶标记的抗体检测此抗原-抗体复合物。洗板除去未结合的酶联物，再加入含TMB和过氧化氢的显色剂并温育：溶液中所显示的蓝色深度与结合到包被板上的酶免复合物的量成正比。加入2N的H2SO4 终止酶促反应，在450nm处测OD值。以OD值对相应的标准品浓度作一条标准曲线，我们可以直接从标准曲线上获得病人样品中CRP的量。
3、试剂盒成分
1）  包被了抗体的包被板，96孔，包被板上包被了兔抗人CRP。
2）  标准品，5支，每支都含预先已稀释10倍的CRP标准品溶液（0.2ml）,0;5;25;50;100ng/ml，每支内都含0.1％的NaN3和抗菌剂。
3）  酶标物，1支，内含过氧化物酶标记的单克隆抗人CRP抗体，12ml，每支内都含抗菌剂和惰性红染料。
4）  样品稀释液，2支，内含100ml已稀释好的样品稀释液，每支内都含0.1％的NaN3、抗菌剂和惰性绿染料。
5）  浓缩洗涤液，2支，内含25ml 20倍浓缩的磷酸盐缓冲液
6）  TMB底物液，1支，25ml，内含H2SO4和TMB
7）  终止液，1支，内含10ml 1M的H2SO4
4、实验所需设备但试剂盒不提供
1）  移液器和标准取样吸头
2）  干净的实验用玻璃量瓶
3）  用于样品稀释的玻璃试管
4）  酶标仪
5、样本采集和准备
在此实验中将用到人血清和血浆，尽快从血液中分离出血清以避免溶血。脂血和溶血样品会导致错误的实验结果。将血清转移到干净的试管中，样品可在2-8℃的环境下储存几天，如果冻存则可存放更长的时间。避免反复冻融。
6、实验步骤
6.1一般注意事项
1）  为了避免交叉反应，每一样品都应当用新的取样吸头来进行分配。
2）  实验开始前，所有的试剂都必须平衡至室温。所有的试剂混合时都必须避免泡末产生。
3）  一旦实验开始，所有的步骤都必须完整的进行下去。
6.2试剂的制备
1）  洗涤液：用500ml蒸馏水稀释25ml浓缩洗涤液。
6.3操作步骤
1）  将预先已稀释10倍的标准品血清按1：100的比例进行稀释：将每一标准品各10μl加入到相应的玻璃试管中，再加入990μl样品稀释液并充分混合。
2）  将病人样品按1：1000的比例进行两次连续稀释，将每一病人样品各10μl加入到相应的玻璃试管中，再加入990μl样品稀释液并充分混合。再向50μl预先已稀释100倍的样品中加入450μl样品稀释液。注意：实验使用时临时制备，不要稀释液存放30min以上。
3）  将100μl已稀释好的标准品和样品加入到相应的微孔中（双份检测）。
4）  盖板，室温温育30±2min
5）  用洗涤液洗板3次。可用洗板机洗板或人工手动洗板。洗板时让洗涤液在包被孔中停留2-3min，弃取孔内反应物后在吸水纸上拍干。
6）  每孔加入100μl酶联物，盖板，室温温育30±2min
7）  同步骤5）
8）  每孔加入100μl显色剂
9）  室温避光温育10±2min
10）每孔加入50μl终止液（2N的H2SO4）
11）加终止液30min之内在450nm处读取OD值。
7、参考值
每个人的血液中都含有少量的CRP，其正常值的上限为5到8μg/mL。用CRP ELISA试剂盒检测568份正常样品，其中有95%以上的样品CRP水平低于5μg/mL

本译文仅供参考，详情请以原文为准。

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