【求助】求神经元鉴定（MAP-2）的protocol,急！

【求助】求神经元鉴定（MAP-2）的protocol,急！

【求助】求神经元鉴定（MAP-2）的protocol,急！-2010-08-10 03:57:24 AM

我现在想做神经元鉴定，选了MAP-2，试剂是借的别人的，没有说明书可参考，请问哪位战友能告知详细的protocol，急，谢谢！email:abcdefg20052006@163.com。谢谢！你起码知道哪个公司的，
什么抗什么的吧。
各种公司的MAP-2抗体种属来源都不同的。
另外，大体的免疫组化条件也得摸索一下阿MAP2需要作抗原热修复。
在多聚甲醛固定后，先用PBS洗2次，用92-96度的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液煮片20min，自然冷却至室温。
而后就是常规的细胞免疫化学步骤：
3%H2O2孵育10min，PBS洗3次
5%羊血清，用0.1%TritonX-100/PBS配制的封闭液封闭1hr，PBS洗3次
MAP-2一抗，4度孵育过夜，PBS-Triton洗3次
二抗用0.1%TritonX-100/PBS配制，室温1hr，PBS洗三次
甘油封片。多聚甲醛固定20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
0.3%TritonX-100作用20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
10%羊血清封闭50分钟r，吸走多余血清，不用PBS洗
MAP-2一抗，4度湿盒孵育过夜
PBS洗3次，每次5分钟
滴加二抗（荧光标记），室温50～60分钟，
PBS洗3次，每次5分钟
甘油封片。
这是我的实验步骤，请参考多聚甲醛固定20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
0.3%TritonX-100作用20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
10%羊血清封闭50分钟r，吸走多余血清，不用PBS洗
MAP-2一抗，4度湿盒孵育过夜
PBS洗3次，每次5分钟
滴加二抗（荧光标记），室温50～60分钟，
PBS洗3次，每次5分钟
甘油封片。
这是我的实验步骤，请参考多聚甲醛固定20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
0.3%TritonX-100作用20分钟，PBS洗3次，每次5分钟
10%羊血清封闭50分钟r，吸走多余血清，不用PBS洗
MAP-2一抗，4度湿盒孵育过夜
PBS洗3次，每次5分钟
滴加二抗（荧光标记），室温50～60分钟，
PBS洗3次，每次5分钟
甘油封片。
这是我的实验步骤，请参考谢谢大家热心帮忙！
我按你们说的做了，结果还行。
谢谢！你是按照那个做的？用煮的吗？我本来也想做MAP2鉴定神经元纯度，可是操作时忘记在皿中加玻片了，直接用35mm的皿可以做免疫荧光吗？

发表者QINQIN 时间 2010-08-10 03:57:24 AM

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