【求助】帮我想想这个图的原因吧!《帮忙看看这个图!哭了!急!》后续
2009-06-18 11:18:21 PM
上次跑的2D图一塌糊涂,无奈之余向各位战友请教,得到了各位大侠的无私相助。自己回去又做了几次后,图像有所改进。能够看到一些点了。
但是我又怀疑起我的图的真实性与可靠性了。因为我一师兄感觉我的点太规则,不像一副常规的2D图。怀疑是不是蛋白点在处理时已经被修饰,或者降解等。
大家帮我看看吧。第一副图是上次求助时的图。第二三张是后来跑的。点排列这么有规律是怎么回事那?是细菌蛋白的特性使然,还是我处理不当造成?此现象不同胶重复性较高。
期待您的高见。
screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=553 title="Click to iew full 14105030.snap.jpg (640 X 553)" border=0 align=absmiddle>
第二张。
screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=524 height=537 title="Click to iew full pH4-7.JPG (524 X 537)" border=0 align=absmiddle>
第三张
screen.width-333)this.width=screen.width-333" width=640 height=571 title="Click to iew full 3-10NL.JPG (662 X 591)" border=0 align=absmiddle>
不要急着哭啊!如果重复性不错,那么结果或许就是这样子的!呵呵GOOD LUCK!
不要急着哭啊!如果重复性不错,那么结果或许就是这样子的!呵呵GOOD LUCK!
多谢lulu82大侠的鼓励.
别的同学有什么看法呢?有遇到过这种情况的吗?
还是不敢肯定.
建议先用银染,跑出好的分析型2DE,在改用考染做制备型。毕竟考染灵敏度低,或改用blue Siler法。
不知你做的是什么细菌?给你发一份E.coli的国际标准化图谱,作参考。
(缩略图,点击图片链接看原图)
多谢DIGE.我的不是E.coli.是一种自养菌。我用的就是blue siler.感觉跟普通考然差不多。
还有,你觉得我那几个明显排成一排的点是怎么回事?有这种可能吗?
我也想问Blue siler与普通的考然有什么区别吗??
感觉你的点少,点比较模糊。可能是样品本身的问题。我觉得你应该用一种方法沉淀一下蛋白样品。
冻结的春天 wrote
你觉得我那几个明显排成一排的点是怎么回事?有这种可能吗?
这是有可能的,我做的样品在中高分子量处也有类似的点。蛋白spots的真实性主要来源于重复。如果做的点重现性很好,那就不要怀疑自己了
我觉得你的图跑的挺好的,其他发表的文献上有的图还不如你的图呢。 我想问你的菌是G+ or G-? 我以前也得到你类似的情况,几个点排在一起,但是跑的结果没你那么漂亮, 我的细菌是G-的。 但是抠点做MALDI-TOF后,却查不到蛋白,(因为我的细菌是我们实验室分离的,基因组没测序)。然后就暂停了实验。 我想问你下一步做什么呢? 或许我们可以讨论讨论。
你做的是细菌蛋白的哪一个祖份
若是细菌表面蛋白就不奇怪了(很多糖基化修饰的)
你做的是细菌蛋白的哪一个祖份
若是细菌表面蛋白就不奇怪了(很多糖基化修饰的)
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