【求助】帮我想想这个图的原因吧！《帮忙看看这个图！哭了！急！》后续

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【求助】帮我想想这个图的原因吧！《帮忙看看这个图！哭了！急！》后续-2010-05-30 07:48:01 AM

上次跑的2D图一塌糊涂，无奈之余向各位战友请教，得到了各位大侠的无私相助。自己回去又做了几次后，图像有所改进。能够看到一些点了。
但是我又怀疑起我的图的真实性与可靠性了。因为我一师兄感觉我的点太规则，不像一副常规的2D图。怀疑是不是蛋白点在处理时已经被修饰，或者降解等。
大家帮我看看吧。第一副图是上次求助时的图。第二三张是后来跑的。点排列这么有规律是怎么回事那？是细菌蛋白的特性使然，还是我处理不当造成？此现象不同胶重复性较高。
期待您的高见。
第二张。
第三张
不要急着哭啊！如果重复性不错，那么结果或许就是这样子的！呵呵GOOD LUCK!不要急着哭啊！如果重复性不错，那么结果或许就是这样子的！呵呵GOOD LUCK!多谢lulu82大侠的鼓励.
别的同学有什么看法呢?有遇到过这种情况的吗?
还是不敢肯定.建议先用银染，跑出好的分析型2DE，在改用考染做制备型。毕竟考染灵敏度低，或改用blue Siler法。
不知你做的是什么细菌？给你发一份E.coli的国际标准化图谱，作参考。
（缩略图，点击图片链接看原图）多谢DIGE.我的不是E.coli.是一种自养菌。我用的就是blue siler.感觉跟普通考然差不多。
还有，你觉得我那几个明显排成一排的点是怎么回事？有这种可能吗？我也想问Blue siler与普通的考然有什么区别吗？？感觉你的点少，点比较模糊。可能是样品本身的问题。我觉得你应该用一种方法沉淀一下蛋白样品。这是有可能的，我做的样品在中高分子量处也有类似的点。蛋白spots的真实性主要来源于重复。如果做的点重现性很好，那就不要怀疑自己了我觉得你的图跑的挺好的，其他发表的文献上有的图还不如你的图呢。我想问你的菌是G+ or G-? 我以前也得到你类似的情况，几个点排在一起，但是跑的结果没你那么漂亮，我的细菌是G-的。但是抠点做MALDI-TOF后，却查不到蛋白，（因为我的细菌是我们实验室分离的，基因组没测序）。然后就暂停了实验。我想问你下一步做什么呢？或许我们可以讨论讨论。你做的是细菌蛋白的哪一个祖份
若是细菌表面蛋白就不奇怪了（很多糖基化修饰的）你做的是细菌蛋白的哪一个祖份
若是细菌表面蛋白就不奇怪了（很多糖基化修饰的）

发表者QINQIN 时间 2010-05-30 07:48:01 AM

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