【求助】请教如何分离细菌膜蛋白（革兰氏阴性菌）

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哪位高人指点一二？最好有文献，不胜感激！

分离细菌膜蛋白的方法：
① 于20ml 营养肉汤中过夜培养细菌，37℃，200rpm。
② 10000g、20min、4℃离心，去上清。 bio.jeweloe.net
③ 20ml预冷的Tris-Mg缓冲液重悬，同样条件离心，再重悬于预冷的Tris-Mg缓冲液。
④ 超声波破碎细菌。
⑤ 3000g，10min、室温下离心去除未破碎细菌。小心吸取上清（含有胞质成分和细菌外被成分）。
⑥ 超速离心I：100,000g，60min，4℃，去除上清（胞质成分），收集细菌外被成分。
⑦ 用10ml含2％的SLS的Tris-Mg 缓冲液重悬沉淀物，室温温育20-30min。
⑧ 超速离心II：70,000g，60min，室温沉淀收集外膜蛋白，去除上清（含细胞质膜）。重复⑦、⑧两步。
⑨ 充分吸除上清，并根据沉淀体积大小用0.1-0.2 ml的ddH2O重悬沉淀物。根据公式：蛋白浓度(mg/ml)=1.450 D280-0.740 D260测定外膜蛋白浓度，调节蛋白浓度至40ug/ul，该蛋白质样品-70℃贮存。
试剂
① Tris-Mg 缓冲液
10mM Tris-Cl
5mM MgCl2
pH 7.3，4℃保存 bio.jeweloe.net生物学习之家
② 2%(w/)十二烷基肌氨酸钠 (SLS)

谢谢指教。

再问一下，如果需要得到大约100uL 40ug/uL的膜蛋白，需要大约多少细菌细胞（湿重）？能否给篇原始文献，有题目就行。

碳酸盐处理

给你个文献看一下吧

r the separation of integral membrane proteins.pdf (290.67k)