【求助】帮忙看看2D胶图

2009-07-01 07:58:26 PM

【求助】帮忙看看2D胶图

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IPG胶条:17cm,3-10NL
凝胶:12%

(缩略图,点击图片链接看原图)

银染,上样量为300ug。
二向电泳我是以功率为标准,先是2w30分钟,在是20w,运行了大约6h。
请各位帮忙分析一下!!!
非常感谢。

哦,以功率为标准的话,我是第一次听说了.
估计功率运行和恒压类似吧.不过一般都以恒流进行,其功率是慢慢变大.

蛋白点跑成这样是怎么回事呢?以前我也是以电流为标准,跑出的点还可以,难道以功率为标准就会跑成这样吗??

  不知道你二向使用的装置是什么?在说明书中应该有功率的上限。

  我做的时候不超过5W,一般在2W左右,或者1W过夜。

  是不是功率太大的缘故。

二向的装置是 PROTEAN II xi,请问有人知道这个电泳槽的运行条件。

样品有没有问题,看样子你等电聚焦都没有跑开啊,还有你的胶面怎么黑乎乎的,银染试剂有没有问题

你的胶没法看,你首先得解决你银染的问题,要不就是试剂有问题,要不就是染色步骤有问题.

同学你的问题解决了么
我也是遇到过相同的情况
不过染色背景不是那么深
蛋白质点很少
是不是我们的SDS-PAGE胶出了问题

我觉得你的平衡液中的SDS量有些少,在平衡的过程中蛋白没有完全被SDS包裹。

肯定是胶出了问题,至于问题是什么,我也不知道。我按照同样的配方,重配了一次,结果就不想这样了。
还有一个可能性,就是琼脂糖封胶没有封好。

是不是你的2向温度高了造成的,20w/gel极易造成电泳散热不好,造成点脱维。

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