【求助】新手上路--转膜遇到的疑惑

2009-06-20 01:48:52 AM

【求助】新手上路--转膜遇到的疑惑

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各位大虾,我的目的蛋白是80KD和62KD,要用的是六一厂的DYCZ-40D型迷你转印槽 ,硝酸纤维素膜和PDF膜各有2张(都是别人给的,自己没有去买)湿转,电泳仪只能恒流不能恒压。不能4度转,最多是用泡沫盒装冰块来进行降温。
问题:
1.我该如何选择电流?
2.在用硝酸纤维素膜和PDF膜时转膜的条件是否一样?如果不一样,应该如何调整?请多帮助!!谢谢!!!

你做的蛋白分子量居中,应该是很好转膜的。建议:
1. 在最好的降温环境中转膜,由于不能在4度转膜,因此建议你用快转,恒流最好,400mA,90分钟即可,不推荐过夜转(过夜转的条件是100mA);
2. NC膜和PDF膜转膜条件基本一致,至少我用这两种膜都做过没有问题(当然要考虑孔径,我们用的是0.45的),不过有一个细节,在预处理膜的时候,NC膜不能用纯甲醇处理,直接放到电转液中泡20min即可,而PDF则需要在纯甲醇中预处理5min,在放入电转液中。
还有一个小小的Tip:我们实验室就是把放有电转槽的冰盒放到4度冰柜中,这样转膜过夜的,效果也很好,不过过夜转和快转效果差不多,,所以还是建议快转了,节约一天的时间呢!

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