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【求助】Western 结果请帮忙分析

【求助】Western 结果请帮忙分析-2010-06-23 05:38:13 AM

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蛋白上样量为25ug, 10%的胶,70 *10min再100至溴酚兰跑至底。内参的条带为何会如此?帮忙分析一下吧,都连在一块了,实在无法分析!我该如何改进呢?
W07522-a.tif (17.66k)
1 内参稀释倍数是多少,可能内参效价特别高,可以加大稀释倍数
2 蛋白还可以减少点样
3 丙希酰胺质量,别人用你的丙希酰胺,结果是否也是这样,以前我们有一瓶双叉丙希酰胺配出来的胶很容易连在一块,后来换了一瓶就比较好了。
多谢!
内参是1:1000,加大稀释倍数可以试试
另一个我要检测的蛋白表达很低,所以不能减少蛋白的量
丙烯酰铵我一个月前用还没问题,不过也不排除它的因素。
内参在细胞中的表达量是相对比较多的,就10ug的总蛋白也能爆出很明显条带,出现这种情况,可以尝试几个方法:
1、减少上样量
2、如果目的蛋白丰度不够的话,上样量不能少,那可以适当减少压片时间
3、在允许的范围之内,增加一下你分离胶浓度。
4、注意一下你分离胶的盐离子浓度和PH值情况。

发表者QINQIN 时间 2010-06-23 05:38:13 AM

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