【求助】Western 结果请帮忙分析

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蛋白上样量为25ug, 10％的胶，70 *10min再100至溴酚兰跑至底。内参的条带为何会如此？帮忙分析一下吧，都连在一块了，实在无法分析！我该如何改进呢？

W07522－a.tif (17.66k)

1 内参稀释倍数是多少，可能内参效价特别高，可以加大稀释倍数
2 蛋白还可以减少点样
3 丙希酰胺质量，别人用你的丙希酰胺，结果是否也是这样，以前我们有一瓶双叉丙希酰胺配出来的胶很容易连在一块，后来换了一瓶就比较好了。

多谢！
内参是1:1000，加大稀释倍数可以试试
另一个我要检测的蛋白表达很低，所以不能减少蛋白的量
丙烯酰铵我一个月前用还没问题，不过也不排除它的因素。

内参在细胞中的表达量是相对比较多的，就10ug的总蛋白也能爆出很明显条带，出现这种情况，可以尝试几个方法：
1、减少上样量
2、如果目的蛋白丰度不够的话，上样量不能少，那可以适当减少压片时间
3、在允许的范围之内，增加一下你分离胶浓度。
4、注意一下你分离胶的盐离子浓度和PH值情况。