【求助】想做磷酸化的细胞外信号调节激酶（P-ERK）蛋白

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小弟是新手，不是很懂wb，最近想做小鼠脑内组织磷酸化的细胞外信号调节激酶（P-ERK）蛋白的变化情况，请问各位大侠，是不是还必须知道ERK上磷酸化的具体位点才能行啊？

将组织样品先液氮研磨使细胞充分破裂
研磨过程中要保持低温的状态
再加裂解液裂解提取蛋白，加入裂解液之后放冰上冰浴30min,然后4度12000g离心5min,吸取上清即可，最好分装然后-80保存
裂解液的配方很多，可以在园里搜一下，常用的是RIPA方案
50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系
150 mM NaCl 等渗体系
1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂
1 mM EDTA 变性剂和稳定剂
5 µg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂
5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂
1% Triton x-100 破坏细胞
1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂
0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂
其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制，－20℃保存，用前混合。
由于你提取的是磷酸化的ERK,应该还要加入NA3O4,NaF,以防磷酸化蛋白的降解
p-ERK提取总蛋白就可以了，不须知道ERK上磷酸化的具体位点