【求助】纯化蛋白

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我想请教一个问题,我纯化蛋白过Ni柱后怎么除了目的条带还有好多条带,和没过柱之前基本一样,而且在除杂蛋白的那一步也有目的条带,跑电泳与洗柱(洗目的条带)液跑电泳一样.这是为什么呀?有没有好的方法(步骤和试剂)?能不能给我参考一下?

不好意思,我写错了,不是在除杂蛋白的那一步也有目的条带,而是在将蛋白样品加到柱后的滤液有目的条带,而洗脱的目的条带中有杂带,和没过柱之前基本一样.这是为什么

你的Binding Buffer pH值是7.8吗？

PH是8.0我Binding Buffer 配方: 50 mM Tris-HCl pH8.0
     0.3 M NaCl
       10 mM Imidazole

不知还有没有好的建议?