【求助】是否有人用过酵母细胞质双杂交系统，兼讨论酵母双杂交问题

【求助】是否有人用过酵母细胞质双杂交系统，兼讨论酵母双杂交问题

【求助】是否有人用过酵母细胞质双杂交系统，兼讨论酵母双杂交问题-2010-06-17 07:54:39 PM

在传统的酵母双杂交系统中，蛋白质需要入核发生相互作用，才能激活报道基因表达；因此对于发生在细胞质中或者细胞膜上的蛋白质相互作用是检测不到的。最近几年开发出了一种细胞质的酵母双杂交系统，与传统的基于转录因子GAL4或者LexA的方法不同，细胞质双杂交是在Ras途径的基础上建立的。如Stratagene CytoTrapTM 双杂交系统。可以参考链接http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews2005/gene26.htm
最近本人在做一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的酵母双杂交，想吊出它的互作基因，前段时间用INITROGEN的 PROQUEST TWO-HYBRID SYSTEM筛过一次库，没有得到任何阳性克隆，我估计是连入载体的基因太长有3KB多，1000多个氨基酸，可能就算表达出来了也不能行使正常功能。随后取了蛋白的激酶区1.8KB，想重新筛一次库（还未开始重筛）。后来老板的建议是要我试试酵母细胞质双杂交系统，因为在生物体内，我所研究的蛋白是在细胞质中表达的，可能在酵母细胞核中也不能正常工作（猜测）。
这两天我查了查，发现细胞质的双杂交完全不同，要是做的话还有重新购买另外的试剂盒，重新构建文库。
还有一点就是，前人发表的文章，同样是做我这种蛋白激酶的，都是用传统的酵母双杂交系统筛选到互作蛋白的，如果情况是这样的话我是否还有必要尝试细胞质的双杂交呢？
还是等我做了激酶区的筛库之后再说？
请各位帮忙看看，谢谢。

发表者QINQIN 时间 2010-06-17 07:54:39 PM

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