【求助】镍柱纯化，洗脱不成功

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大家好，本个在做镍柱纯化，出现的怪现象。
原核表达目的蛋白，菌体超声后的上清中，His抗体检测到目的蛋白，上镍柱后，60mM咪唑没有洗脱掉任何蛋白，但是在80mM时出现一峰，以后直到500mM咪唑浓度也没有见到洗脱峰，对回收蛋白进行鉴定，结果多条带，WB也检测到目的蛋白。本人认为镍柱没有挂上目的蛋白，原因是什么呢？

目的蛋白挂没挂上，你把穿透液跑胶对比一下不就知道！

加大上样量,仔细看说明书,小心你的样品,觉得还是操作本身的问题.