【求助】真核表达的蛋白比预计的大问题在哪里？

我选用的真核表达质粒带IgK信号肽和HIS标签，目的基因导入该质粒后经测序证实无误，质粒瞬转CHO细胞，48小时后收上清，Ni柱纯化，收获的蛋白经定量约1mg/ml，作western blot在50kd处有一条带。问题是我的预计的蛋白大小包括目的蛋白和质粒融和表达的标签，剪切后的信号肽及多克隆位点翻译的蛋白量所有加起来也不过32kd。有人说可能是真核表达修饰必较多，可是我的作western的蛋白是经过变性的，为什么预计与实际的差别会这么大，有问题吗？我纯化的蛋白是准备制备单抗的，所以比较担心。希望得到各位高手的指教！谢谢！

另外还有个问题，如果是考虑coalently modification，那是不是不能用来作单抗？有很大的影响吗？

怎么没人有相关的经验可以参考吗？苦恼中。。。