【求助】构建质粒的问题

在构建质粒的时候，SD序列与起始密码子之间的距离多少合适？
到目前我已经看到了三个说法：分子克隆（5－7个碱基）、基因组（3－10个碱基）、好有其他的一些说法（5－13个碱基）。
我最近用别人给我的一个质粒来表达，我发现它的SD序列距目的基因的起始密码子有8个碱基，我怀疑我的蛋白不表达可能与这个有关。（因为我已经把表达过程中可能考虑的情况都考虑了，包括稀有密码子。）

8个应该没有什么问题,请考虑其他的原因.比如说转录的RNA形成的二级结构把SD位点封阻了,以至不能翻译.